|
ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО |
||
|
|
НАЦИОНАЛЬНЫЙ |
ГОСТ Р (ИСО 11816-1:2006) |
МОЛОКО И МОЛОЧНЫЕ ПРОДУКТЫ
Определение активности щелочной фосфатазы
Часть 1
Флуориметрический метод для молока и молочных продуктов
ISO 11816-1:2006
Milk and milk products -
Determination of alkaline phosphatase activity - Part 1:
Fluorimetric method for
milk and milk-based drinks
(MOD)
Москва
Стандартинформ
2009
Предисловие
Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. № 184-ФЗ «О техническом регулировании», а правила применения национальных стандартов Российской Федерации - ГОСТ Р 1.0-2004 «Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения»
Сведения о стандарте
1 ПОДГОТОВЛЕН ОАО «Всероссийский научно-исследовательский институт сертификации» (ОАО «ВНИИС») на основе аутентичного перевода международного стандарта, указанного в пункте 4
2 ВНЕСЕН Техническим комитетом стандартизации ТК 335 «Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность»
3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 6 ноября 2008 г. № 289-ст
4 Настоящий стандарт является модифицированным по отношению к международному стандарту 11816-1:2006 «Молоко и молочные продукты. Определение активности щелочной фосфатазы. Часть 1. Флуориметрический метод для молока и молочных продуктов» (ISO 11816-1:2006 «Milk and milk products - Determination of alkaline phosphatase activity - Part 1: Fluorimetric method for milk and milk-based drinks»).
При этом дополнительные слова, фразы, абзацы, включенные в текст стандарта для учета потребностей национальной экономики Российской Федерации и особенностей российской национальной стандартизации, выделены курсивом
5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок - в ежемесячно издаваемых информационных указателях «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет
Содержание
НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
|
МОЛОКО И МОЛОЧНЫЕ ПРОДУКТЫ Определение активности щелочной фосфатазы Часть 1Флуориметрический метод для молока и молочных продуктов Milk and milk products. Determination of alkaline phosphatase activity. Part 1. Fluorimetric method for milk and milk products |
Дата введения - 2010-01-01
Настоящий стандарт устанавливает флуориметрический метод для определения активности щелочной фосфатазы (ALP) в пастеризованном цельном, полужирном и обезжиренном молоке. Метод применим для молока коров, овец, коз и для молочных напитков.
Метод также пригоден для определения высокой активности щелочной фосфатазы в сыром и термообработанном молоке с активностью более 2000 мЕ/л после заданного разбавления образца.
В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения
ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений
ГОСТ 26809-86 Молоко и молочные продукты. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу
Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.
В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:
3.1 активность щелочной фосфатазы (ALP активность): Активность щелочной фосфатазы, присутствующей в продукте, определенная методом, установленным настоящим стандартом.
Примечание - Активность щелочной фосфатазы выражена в миллиединицах активности фермента на литр, мЕ/л.
3.2 единица активности щелочной фосфатазы: Объем фермента щелочной фосфатазы, который катализирует превращение 1 мкмоль субстрата в минуту.
Активность щелочной фосфатазы для образца измеряется путем непрерывного флуориметрического прямого кинетического анализа. В субстрате нефлуоресцентного ароматического монофосфорного эфира, 2'-[2-бензотиазолил]-6'-гидроксибензотиазол фосфат, в присутствии любой щелочной фосфатазы, образованной из этого образца, происходит гидролиз его фосфатного радикала, производя продукт с интенсивной флуоресценцией. Флуориметрическое измерение активности щелочной фосфатазы проводят при температуре 38 °С в течение трех минут, используя субстрат. Сюда включена преинкубация субстрата и образца с последующим многократным кинетическим считыванием скорости реакции.
Примечание - Хотя испытание длится 3 мин, первая минута является равновесным периодом для обеспечения температуры образца 38 °С. Измерения активности фактически начинаются со второй минуты и продолжаются до конца третьей минуты (т.е. 2 мин).
Используются только реактивы признанной аналитической чистоты, если нет других указаний, и дистиллированная или деминерализованная вода или вода аналогичной чистоты.
5.1 Субстрат Флуорофоса® в пробирках, каждая из которых содержит 144 мг порошка Флуорофоса®.
Этот субстрат нефлуоресцентного ароматического монофосфорного эфира, 2'-[2-бензотиазо-лил]-6'-гидроксибензотиазол фосфат (Флуорофос®). Субстрат Флуорофоса® остается стабильным в течение двух лет, если его хранить в закрытых пробирках при температуре от 2 °С до 8 °С.
5.2 Буферный раствор субстрата, буферный раствор диэтаноламина (DEA), с (DEA) = 2,4 моль/дм3,с рН 10,0 в пробирках вместимостью 240 см3каждая.
Буферный раствор субстрата остается стабильным в течение двух лет, если его хранить в закрытых пробирках при температуре от 2 °С до 8 °С.
5.3 Рабочий субстрат
Оставляют субстрат Флуорофоса® и буферный раствор субстрата до достижения комнатной температуры. Добавляют содержимое одной пробирки с буферным раствором субстрата (240 см3) к содержимому одной пробирки Флуорофоса® (144 мг) (см. 5.1) и хорошо перемешивают, переворачивая, в течение 3 мин. Используют желтое стекло для защиты против света.
Перед использованием полученный раствор выдерживают при комнатной температуре как минимум 30 мин.
Используют аналого-цифровой тест, описанный в 9.4.1.1, для проверки устойчивости готового к использованию субстрата.
Рабочий субстрат остается стабильным в течение 60 дней, если он защищен от света и хранится при температуре от 2 °С до 8 °С, или в течение 8 ч, если хранится при 38 °С. Не следует использовать рабочий субстрат, если получено показание выше 1200.
Примечание - Полученный объем рабочего субстрата (240 мл) является достаточным приблизительно для 115 тестов.
5.4 Рабочие калибровочные растворы, Флуорожелтый® (FY), 2'-[2-бензотиазолил]-6'-гидрокси-бензотиазол в буферном растворе DEA.
Рабочие калибровочные растворы остаются стабильными в течение 18 мес, когда их хранят при температуре от 2 °С до 8 °С.
5.4.1 Калибровочный раствор А, содержащий 0 мкмоль/дм3 Флуорожелтого®.
5.4.2 Калибровочный раствор В, содержащий 17,24 · 10-3 мкмоль/дм3 Флуорожелтого®.
5.4.3 Калибровочный раствор С, содержащий 34,48 · 10-3 мкмоль/дм3 Флуорожелтого®.
5.5 Раствор для ежедневного контроля прибора, содержащий 34,48 · 10-3 мкмоль/дм3 Флуорожелтого®.
6.1 Фильтрованный флуориметр с термостатически регулируемым держателем кюветы при поддержании температуры (38 ± 1) °С и правоугольной оптической системой, допускающей возбуждение при длине волны 440 нм и испускание при 520-560 нм (например, прибор Флуорофос®).
Измерения должны быть оптимизированы согласно инструкциям изготовителей.
6.2 Кюветы сменные, из нефлуоресцентного стекла, диаметром 12 мм и длиной 75 мм.
6.3 Пипетки.
6.3.1 Дозатор фиксированного объема, дозирующий по 2,0 см3.
6.3.2 Пипетка вытеснительного типа или нагнетательная вместимостью 0,075 см3.
6.3.3 Пипетка вместимостью 2 см3.
6.4 Инкубаторный блок, поддерживающий температуру (38 ± 1) °С, подходящий для помещения в них кювет.
6.5 Парафильм1) или другая подходящая пленка лабораторного класса.
6.7 Водяная баня, поддерживающая температуру (63 ± 1) °С и (95 ± 1) °С.
6.8 Мерные колбы с одной меткой вместимостью 100 см3.
1) Парафильм является примером подходящего продукта, выпускаемого в промышленности.
В лабораторию должна быть отправлена представительная проба. Ее следует оберегать от повреждений во время транспортирования или хра
